Kromasil色譜柱是一種常用于液相色譜(HPLC)的高性能色譜柱,廣泛應用于化學和生物分析。使用Kromasil色譜柱時,可以遵循以下指南,以確保其最佳性能和延長使用壽命:
1.選擇合適的色譜柱
根據樣品的性質(極性、分子量等)和分析目的選擇合適的Kromasil色譜柱型號。常見的類型有C18、C8、Phenyl等。
2.準備工作
清潔設備:確保色譜系統和管路沒有殘留物質,避免交叉污染。
溶劑準備:使用高純度的溶劑,確保溶劑在使用前經過過濾。
脫氣處理:對流動相進行脫氣處理,以消除氣泡,避免影響分離效果。
3.柱前準備
平衡柱子:在首次使用或更換流動相前,使用相應的流動相進行柱子的平衡。通常需要運行30分鐘到1小時,直到基線穩定。
溫度控制:如果需要,確保色譜柱在規定的溫度范圍內工作。
4.樣品處理
樣品濃度:確保樣品濃度適當,避免過高導致柱子過載。
過濾樣品:使用0.45或0.2微米的濾膜過濾樣品,去除顆粒物,以保護柱子。
5.操作條件設置
流速設定:根據柱子的規格和樣品特性設定合適的流速。一般推薦的流速是柱子直徑和固定相顆粒大小的函數。
檢測波長:選擇合適的檢測波長以提高檢測靈敏度。
6.數據采集與分析
在運行過程中,實時監控色譜圖,確保無異常峰出現。
對獲得的數據進行整理和分析,確認結果的重復性和準確性。
7.后處理與清洗
清洗柱子:在分析結束后,用適當的清洗溶劑沖洗色譜柱,去除殘留物質。對于強極性物質,可能需要用不同極性的溶劑進行洗脫。
儲存:將柱子儲存在干燥、陰涼的環境中,避免陽光直射和極端溫度。
8.維護與保養
定期檢查柱子的性能,監測柱壓和柱效,及時進行維護。
遇到柱效下降或基線噪聲增加時,考慮進行再生或更換柱子。
9.注意事項
避免使用pH值超過柱子耐受范圍的流動相,通常KromasilC18柱子耐受的pH范圍為2-8。
避免高溫或高壓操作,以防損壞色譜柱。